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Id: 8856 Autor: Palomino-Camargo, Carolina; González-Muñoz, Yuniesky. Título: Técnicas moleculares para la detección e identificación de patógenos en alimentos: ventajas y limitaciones^ies / Molecular techniques for detection and identification of pathogens in food: advantages and limitations Fuente: Rev. peru. med. exp. salud publica;31(3):535-546, jul.-sept. 2014. ^bilus, ^btab. Resumen: Las enfermedades transmitidas por alimentos, ocasionadas por microorganismos patógenos, constituyen un grave problema de salud pública a nivel mundial. Los métodos microbiológicos utilizados comúnmente en la detección de estos patógenos, de origen alimentario, son laboriosos y consume mucho tiempo. Esta situación, aunada a la demanda por resultados inmediatos y a los avances tecnológicos, ha conducido al desarrollo de una amplia gama de métodos rápidos en las últimas décadas. En base a esto, la presente revisión describe las ventajas y limitaciones de los principales métodos moleculares utilizados en la detección e identificación de microorganismos patógenos transmitidos por alimentos. Para ello, se consideró la actualidad de la información consultada, el análisis objetivo de la temática y su alcance. La literatura reciente reporta un número significativo de técnicas moleculares, alternativas, sensibles y selectivas para la detección, enumeración e identificación de microorganismos patógenos en alimentos, siendo la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) la plataforma más popular, mientras que la secuenciación de alto rendimiento se perfila como una técnica de gran aplicabilidad a futuro. Sin embargo, aun con todas las ventajas que ofrecen estas novedosas metodologías, no se deben pasar por alto sus limitaciones. Así, por ejemplo, los métodos moleculares no constituyen protocolos estandarizados, lo que dificulta su utilización en algunos casos. Por esta razón se debe trabajar arduamente para superar tales limitaciones y mejorar la aplicación de estas técnicas en matrices tan complejas como los sistemas alimenticios. (AU)^iesFoodborne diseases, caused by pathogenic microorganisms, are a major public health problem worldwide. Microbiological methods commonly used in the detection of these foodborne pathogens are laborious and time consuming. This situation, coupled with the demand for immediate results and with technological advances, has led to the development of a wide range of rapid methods in recent decades. On this basis, this review describes the advantages and limitations of the main molecular methods used in detection and identification of foodborne pathogens. To this end, we considered how recent the information was published, the objective analysis of the topic and its scope. Recent literature reports a significant number of alternative, sensitive and selective molecular techniques for detection, enumeration and identification of pathogenic microorganisms in food. Polymerase chain reaction (PCR) is the most popular platform, while high performance sequencing is emerging as a technique of wide applicability for the future. However, even with all the advantages of these new methodologies, their limitations should not be overlooked. For example, molecular methods are not standardized protocols, which hinders its use in some cases. For this reason, hard work should be done to overcome these limitations and improve the application of these techniques in complex matrices such as food systems. (AU)^ien. Descriptores: Técnicas de Diagnóstico Molecular Microbiología de Alimentos Epidemiología Molecular Contaminación de Alimentos Calidad de los Alimentos Medio Electrónico: http://www.rpmesp.ins.gob.pe/index.php/rpmesp/article/view/93/93 / es Localización: PE14.1

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Id: 8264 Autor: Asencios, Luis; Galarza, Marco; Quispe, Neyda; Vásquez, Lucy; Leo, Elena; Valencia, Eddy; Ramírez, Juan; Acurio, Margoth; Salazar, Rosario; Mendoza-Ticona, Alberto; Cáceres, Omar. Título: Prueba molecular genotype MTBDRplus, una alternativa para la detección rápida de tuberculosis multidrogorresistente^ies / Molecular test genotype MTBDRplus, an alternative to rapid detection of multidrug resistance tuberculosis Fuente: Rev. peru. med. exp. salud publica;29(1):92-98, ene.-mar. 2012. ^btab, ^bgraf. Resumen: La prueba molecular Genotype MTBDRplus, es un método que permite identificar las mutaciones más frecuentes asociadas con la resistencia a las drogas antituberculosas de primera línea: isoniacida (INH) y rifampicina (RIF). El objetivo de este estudio fue evaluar el desempeño de la prueba molecular con cultivos y muestras de esputo con baciloscopía positiva. Se evaluó 95 cultivos y 100 esputos con perfiles de resistencia previamente determinados por el método de referencia “proporciones agar en placa” (APP). La prueba molecular a partir de cultivos mostró una sensibilidad de 100 por ciento;97,5 por ciento y 96,9 por ciento para RIF, INH y multidrogorresistente (MDR) respectivamente; mientras que para esputo la sensibilidadfue de 95,7 por ciento; 96,8 por ciento y 95,2 por ciento para RIF, INH y MDR respectivamente. Se concluye que Genotype MTBDRplus es una herramienta muy útil para la detección rápida de la resistencia a INH y RIF simultáneamente (MDR) en un máximo de72 h a partir de esputo o de cultivo(AU)^ies. Descriptores: Tuberculosis Resistente a Múltiples Medicamentos Técnicas de Diagnóstico Molecular Mutación Isoniacida Rifampin Validez de las Pruebas - Perú  Epidemiología Descriptiva  Epidemiología Experimental Límites: Humanos Medio Electrónico: http://www.ins.gob.pe/insvirtual/images/artrevista/pdf/rpmesp2012.v29.n1.a14.pdf / es Localización: PE14.1

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Id: 8107 Autor: Moreno, Natali; Agudelo-Flórez, Piedad. Título: Aplicación de las pruebas de PCR convencional simple y múltiple para la identificación de aislamientos de Leptospira spp. en Colombia^ies / Application of conventional and multiplex PCR assays for identification of isolates of Leptospira spp. in Colombia Fuente: Rev. peru. med. exp. salud publica;27(4):548-556, dic. 2010. ^bilus, ^btab. Resumen: Debido a las dificultadas asociadas con la identificación serológica de aislamientos de Leptospira ssp, se genera gran interés en la pruebas moleculares por su poder discriminatorio, reproducibilidad y fßcil interpretación. Objetivo. Aplicar y validar la prueba de PCR convencional, usando dos pares de iniciadores descritos previamente y dirigidos a los genes lipL32 (PCR simple) y secY/flaB (PCR múltiple), con el fin de evaluar su aplicación para identificar especies patógenas y saprófitas de Leptospira spp. Materiales y métodos. Para la estandarización de las pruebas de PCR se usó 22 cepas de referencia internacional y 12 aislamientos colombianos. Se determinó el nivel de detección de cada pareja de iniciadores, su especificidad frente a otros microorganismos causantes de enfermedades endémicas en Colombia y su capacidad de identificar especies dentro del grupo de Leptospira. Resultados. El límite de detección de la PCR simple lipL32 fue una dilución 1:10000 y para la PCR múltiple secY/flaB fue una dilución 1:100 para el gen secY y 1:1000 para flaB. La especificidad de todos los iniciadores fue de 100 por ciento. La PCR simple lipL32, mostró amplificado específico para 21/22 cepas de referencia mientras que la PCR multiple secY/flaB lo fue para 18/22 cepas. De los 12 aislamientos colombianos, siete fueron positivos por PCR lipL32 y seis lo fueron por PCR secY/flaB. Conclusiones. Los resultados mßs consistentes fueron obtenidos con la PCR simple lipL32 tanto en límite de detección, especificidad y utilidad para la identificación de Leptospira spp, por lo que esta prueba es aplicable a la identificación molecular de aislamientos patógenos de Leptospira spp de diversas fuentes.(AU)^iesSerological identification of Leptospira ssp isolates is difficult to achieve. Thus, molecular testing may be of great interest thanks to its high discrimination power, reproducibility and easy interpretation. Objective. To implement and validate conventional and multiplex PCR methods (using primers directed against lipl32 and secY/flaB genes, respectively). To assess the capacity of PCR methods to identify pathogenic and saprophytic species of Leptospira ssp. Material and methods. 22 international reference strains and 12 colombian isolates were used. DNA was extracted with a commercial kit (Wizard). Specificity and sensitivity of both PCR methods were evaluated. Results. The maximum dilution of DNA samples allowing the detection of Leptospira ssp was determined to be 1:10000 for the PCR lipL32 and 1:100/1:1000 for the multiplex PCR secY/flaB. Both PCR didn't detect DNA from microorganisms unrelated to Leptospira ssp. The lipL32 PCR specifically amplified a 423bp fragment from all pathogenic Leptospira reference strains, while the secY/flaB PCR amplified both 285bp (secY) and 793bp (flaB) fragments from 18 reference strains. The lipL32 PCR detected 7/12 colombian isolates, while secY/flaB PCR detected both secY and flaB genes from 6/12 isolates. Conclusions. Best results were obtained with the lipL32 PCR, which displayed a better sensitivity and a better capacity to detect different strains than the multiplex PCR. The secY primers showed a poor specificity to pathogenic species and a poor sensitivity. Thus, lipL32 primers show high potential for molecular diagnosis of Leptospira spp in clinical and environmental samples.(AU)^ien. Descriptores: Leptospira Reacción en Cadena de la Polimerasa Técnicas de Diagnóstico Molecular - Colombia Medio Electrónico: http://www.ins.gob.pe/insvirtual/images/artrevista/pdf/rpmesp2010.v27.n4.a9.pdf / es Localización: PE14.1

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